众所周知，血管的稳态功能下降关系到多种疾病和病理状况的发生和发展，如癌症、动脉硬化、慢性炎症和缺血。在此背景下，了解微血管损伤和血管新生的详细机制是非常重要的。本应用手册将介绍一个3D血管新生结构（利用体外灌注血管生成模型）的详细观察和分析实例，该实验借用于MIMETAS公司的3D组织培养平台OrganoPlate®，并使用Nikon激光共聚焦显微镜AX/AX R系统采集图像。
实验结果
为了观察血管尖端的形态及其组成细胞的定位，对肌动蛋白和CD31（血管内皮细胞的标记物）进行了染色。通过适用于培养基或凝胶中的样品的水浸式物镜来获取组织的3D图像，图像明亮清晰，可以检测出肌动蛋白和CD31定位的差异（图3b）。这表明，该方法通过使用符合观察目的的物镜，以研究参与血管生成的各种细胞，如尖端细胞（tip cell）、茎细胞（stalk cell）和方阵细胞（phalanx cell）。
高通量对于逐个芯片检测是否存在血管生成非常重要。使用4倍物镜可以通过一次拍摄来观察整个芯片（图4）。通过使用显微镜的AI模块Denoise.ai，可以在维持共振扫描的高速性的同时，获取低噪声的XY-Z图像，从而通过图像分析实现定量评估。
此外，Nikon NIS-Elements 软件可以对2D图像和3D图像进行定量分析。在图5中，使用细胞核的数量、肌动蛋白区域的体积和CD31区域的体积来分析凝胶区域的血管生成的三维分布。
Nikon 激光共聚焦显微镜AX/AX R系统成像视野可达25mm（对角线），可以通过一次拍摄获取大面积的图像。同时，使用共振高速扫描仪和 Denoise.ai，也可减少获取多个芯片图像的时间（图4）。并且，经证实，使用适当的物镜可以详细观察单个血管的形态和其组成细胞的3D排列（图3b）。此外，图像分析工具GA3能够对血管生成进行定量评估（图5），这些结果表明，该系统可应用于要求有高通量的、3D血管生成模型的毒性和药物疗效评估。
产品信息
共聚焦显微镜AX/AX R
图像采集分辨率可达8K×8K, 是以往型号的4倍。大视野25mm（对角线）允许一次捕获大面积的图像，减少光毒性。AX R的共振扫描仪分辨率可达2K×2K，可以每秒720帧（2048×16像素）高速采集和捕捉活样本的动态变化和精细结构。
