尼康NIS-Elements软件的容积对比模块(Volume contrastVC)可以对未染色的细胞进行观察和定量,具有定量相位成像的功能。利用原始图像算法把在不同Z轴深度捕获的无标记明场图像生成类似的荧光图像,使无标记图像分析得以实现。容积对比分析适用于iPS细胞、ES细胞的质量控制和药物研发筛选等,不受染色试剂或荧光探针光毒性的影响。
容积对比VC

当一个细胞被照亮时,穿过细胞区域的光线会比通过无细胞区域的光线发生延迟。这种延迟称为相位,其分布反映了细胞结构。VC 是对这种相位分布进行成像的函数。相位分布 Φ (x, y) 可以由细胞厚度差 h (x, y)(物理厚度)和细胞折射率的变化 Δn(= n-nm) 的乘积表示。

Φ (x, y) = (2πΔn /λ)· h (x, y)。

VC成像流程

VC 可计算和可视化来自于不同焦平面上拍摄的明场图像的多个相位分布 Φ (x, y)
特殊目标。只需一键点击即可实现容积对比图像的重建,不需要特殊的物镜、滤光块或滑片。

通常明场图像具有低的信噪比,很难通过二值化去检测细胞区域。而VC 图像,由于对于细胞比较厚的区域的像素值比较大,从而很容易识别出背景和细胞区域。因此,即使对高密度细胞的区域也很容易进行分割识别,提高细胞计数的准确率。

 

VC可以获得厚度信息

VC一个主要特点就是能够获取厚度信息,这对于传统的相差观察是困难的。与共聚焦图像类似,VC 可以分析细胞的高度差,即使细胞在垂直方向重叠,也能反映细胞结构。

应用实例

VC 可实现细胞状态的无标记定量分析,适用于药效评估。

产品信息

容积对比 (Volume contrast,VC), 此可选功能可以通过NIS-Elements 成像软件从明场图像构建类荧光图像。无需特别的光学配件,定量相位分析可以很容易实现。